Wondasil C18 色譜柱，也叫 ODS 柱，是分析工作中使用zui多，應(yīng)用zui廣的液相色譜柱，占據(jù)了液相色譜柱的半壁江山。正如世界上沒(méi)有兩片*相同的樹(shù)葉，也沒(méi)有兩款一模一樣的 C18 柱，如何在市場(chǎng)上繁雜的 C18 柱中尋找到適合自己分析的那款，是大家非常關(guān)心的話題。

　　正相柱大多以硅膠為柱，或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團(tuán)的鍵合相硅膠柱；反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(tuán)（ODS）稱為Wondasil C18 色譜柱，其它常用的反相柱還C8,C4,C2和苯基柱等。

　　Wondasil C18 色譜柱特點(diǎn)：

　　1、適合用有機(jī)溶劑分離嗜脂性分子，可以非常經(jīng)濟(jì)地大規(guī)模制備各種天然產(chǎn)物

　　2、結(jié)合凝膠過(guò)濾、分配色譜及吸附性層析于一身，分離結(jié)構(gòu)非常相近的分子

　　3、載量可高達(dá)300mg樣品/ml凝膠，極少需要再生，分離效果可保持十幾年不變。

　　作為凝膠柱層析中的關(guān)鍵一環(huán)，選擇合適的填料是關(guān)重要的，下面我們來(lái)了解下。

　　1.當(dāng)目標(biāo)蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚時(shí)，可用PAGE電泳方法或?qū)游龇椒右詼y(cè)定。分離范圍廣闊的Superose HR預(yù)裝柱很適合測(cè)定未知蛋白的分子量。用少量離子交換介質(zhì)在多個(gè)含不同PH緩沖液的試管中，可簡(jiǎn)易地測(cè)出PI，并選擇純化用緩沖液的佳PH。

　　2.若對(duì)目標(biāo)蛋白的特性或樣品成分不太了解，可嘗試幾種不同的純化方法：

　　(1)使用通用的凝膠過(guò)濾方法，選擇分離范圍廣闊的介質(zhì)如Superose、Sephacryl HR依據(jù)分子量將 樣品分成不同組份。

　　(2)用含專一配體或抗體的親和層析介質(zhì)結(jié)合目標(biāo)蛋白。亦可用各種活化偶聯(lián)介質(zhì)偶聯(lián)目標(biāo)蛋白的底物、受體等自制親和介質(zhì)，再用以結(jié)合目標(biāo)蛋白。一步即可得到高純度樣品。

　　(3)體積大的樣品，往往使用離子交換層析加以濃縮及粗純化。高鹽洗脫的樣品，可再用疏水層析純化。疏水層析利用高鹽吸附、低鹽洗脫的原理，洗脫樣品又可直接上離子交換等吸附性層析。兩種方法常被交替使用于純化流程中。